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荧光偏振理论

更新时间:2009-02-20      点击次数:2224

Perrin于1926年首先描述了荧光偏振理论,他观察到溶液中的荧光分子在受到偏振光激发时,如果在激发时分子保持静止,该分子将发出固定偏振平面的发射光(发射光仍保持偏振性)。然而,如果分子旋转或翻转那么发射光的偏振平面将不同于初始激发光的偏振平面。

分子的偏振性与分子旋转驰豫时间成比例,分子旋转驰豫时间是分子转过 68.5度角时所用的时间。 分子旋转驰豫时间与粘度、温度、分子体积和气体常数有关。

原理 当荧光分子受平面偏振光激发时,如果分子在受激发时期(对于荧光素约持续 4纳秒)保持静止,发射光将位于同样的偏振平面。如果在受激发时期,分子旋转或翻转偏离这一平面,发射光将位于与激发光不同的偏振面。 如果用垂直的偏振光激发荧光素,可以在垂直的和水平的偏振平面检测发射光光强(发射光从垂直平面偏向水平平面的程度与荧光素标记的分子的迁移率有关)。如果分子很大,激发时发生的运动极小,发射光偏振程度较高。如果分子小, 分子旋转或翻转速度快,发射光相对于激发光平面将去偏振化。 荧光显微镜 

荧光偏振的定义:

 

荧光偏振的应用  http://www.leikon.cn

荧光偏振是特别用于研究分子间相互作用的技术。这种方法直接及时的检测示踪分子的结合 /自由率。荧光偏振实验在没有固相支持的溶液中进行,允许在低至皮摩尔级的范围内分析真实的平衡。荧光偏振检测并不掺杂样品,因此样品可以被再次处理并被重新分析用于评价 pH、温度和盐浓度改变对结合的影响。此外,荧光偏振实验是实时进行的,并不局限于平衡结合的研究。

应用领域概述  http://www.shkon.com

•  受体 /配体研究(如激素/受体检测)

•  蛋白质 /多肽相互作用

•  DNA/蛋白质相互作用

•  酪氨酸激酶检测

•  竞争性免疫检测

荧光偏振技术的优势

荧光偏振技术比研究蛋白质与核酸结合的传统方法具有更多优势(特别是不生成有害的放射性废物)并且检测限更低,可达亚纳摩尔级范围。此外荧光偏振是真正均相的,允许实时检测(动力学检测),对于浓度变化不敏感,是均相检测形式(中间不含洗涤步骤)的*解决方案。

荧光偏振  http://www.shkon.com.cn

ACTA POLYMERICA SINICA No. 4 ( 1998 )

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